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DAPI染色原理及使用說(shuō)明
更新時(shí)間:2023-08-10   點(diǎn)擊次數(shù):5188次

 DAPI染色原理及使用說(shuō)明

DAPI 是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料。它結(jié)合到雙鏈DNA小溝的AT堿基對(duì)處,一個(gè)DAPI分子可以占據(jù)三個(gè)堿基對(duì)的位置。結(jié)合到雙鏈DNADAPI分子的熒光強(qiáng)度提高大約20倍,常用與熒光顯微鏡觀測(cè),根據(jù)熒光的強(qiáng)度可以確定DNA的量。另外,因?yàn)?/span>DAPI可以透過(guò)完整的細(xì)胞膜,它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下,DAPI染劑是利用紫外光波長(zhǎng)的光線激發(fā)。單獨(dú)DAPI的最大吸收波長(zhǎng)為340nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為488nm;當(dāng)DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時(shí),最大吸收波長(zhǎng)為364nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為454nm10 mM Tris pH7.0,100 mM NaCl10 mM EDTA),其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。DAPI也可以和RNA結(jié)合,但產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度只有與DNA結(jié)合的熒光強(qiáng)度的1/5,其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍約在500nm左右。

 

使用說(shuō)明(僅供參考)

1. 配制工作液:用雙蒸水或PBS稀釋母液,配制成所需要的工作的濃度(0.5-10 μg/mL),工作液可于℃保存6個(gè)月。

2. 固定的細(xì)胞或組織染色:對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品,固定后,適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色,則直接進(jìn)行DAPI 染色。

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片:加入適量DAPI染色液,覆蓋住樣品即可。

對(duì)于懸浮細(xì)胞:至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液,混勻。室溫放置3-5分鐘。 

b)吸除DAPI染色液,用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。

c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360 nm,發(fā)射波長(zhǎng)460 nm。

3. 活細(xì)胞或組織染色:

a)細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液,約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積,必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1 mL染色液,對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100 μL染色液。 

b)在 37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 1020 分鐘。

c)用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360 nm,發(fā)射波長(zhǎng)460 nm。


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